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【1001問】問題251:脂類物質染色有些什么值得注意的地方嗎？

發表時間：2023-02-15 17:22

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脂類物質染色有些什么值得注意的地方嗎？
脂類物質染色方法較為復雜，且不易掌握，有許多需要注意的地方，現介紹如下：
一、脂溶性染料染色技術中的注意事項
1.為避免因溶劑揮發使切片發生沉淀，染色劑須使用密閉器皿。
2.所染的冰凍切片比附在載玻片上的石蠟切片著色較快，因此要用：等量稀釋的蘇木素染胞核3分鐘，且用0.5%鹽酸乙醇分化脂肪切片。
3.顯示脂類的切片決不能用吸水紙吸液或用鑷子壓迫玻片趕除氣泡，因為會使脂滴移位。如有氣泡可用溫水浸掉蓋玻片后再封固；封固冰凍切片最常發生的麻煩事是滴加封固劑之前切片太干燥，發生小滴氣泡，故應在附貼后稍干，及時封片，以免脂滴彌散。
二、脂類物質染色法的注意事項
1.脂肪不溶于水，只溶于脂肪溶劑如濃乙醇、乙醚、氯仿、二甲苯、苯等，因此脂肪標本的制作，需要不含乙醇或不能溶解脂肪的液體固定。脂肪切片一般也不用石蠟或火棉膠包埋，而用冰凍切片或明膠包埋冰凍切片。但用鋨酸固定的脂肪，即使用石蠟切片，脂肪亦不能溶解，因脂肪經鋨酸固定后，不溶于有機溶劑。
2.采用Cain硫酸尼羅藍染色法時：
（1）組織應用甲醛鈣溶液固定。
（2）如經染色，此法的染色作用不足時，可用以下一種方法配制 （尼羅藍硫酸染色液）：尼羅藍5g，蒸餾水99ml，硫酸1ml。將尼羅藍置于蒸餾水后，加入硫酸，混合后煮沸1～2小時，冷卻后過濾，煮沸后的溶液60～70ml。此液可使染色得以彌補。
（3）普通的尼羅藍是用其硫酸鹽，亦稱新亞甲藍。在使用過程中把染料配成蒸餾水飽和溶液，此液內加入1%硫酸作為染色液使用。其中含有三種成分：
①Oxazine Sulfate型物質：水和乙醇內溶解，呈暗藍色，不是脂溶性物質。
②尼羅藍的游離鹽基不是水溶性而是脂溶性很強的紅色物質。
③Cxazine型物質：不是水溶性，脂溶性紅色的也叫尼羅紅，因此尼羅藍染料含有鹽基性染料的兩個方面，中性脂肪被尼羅紅染成紅色，磷脂質及酸脂質以外的酸性物質染成藍色。
（4）尼羅藍染液配制或使用后不能放入冰箱中保存，否則很容易被破壞而不能使用。
（5）用尼羅藍液和1%冰醋酸分化步驟，應掌握同樣溫度。

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