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【1001問】問題249:有沒有一種牙髓神經纖維的顯示方法?

發表時間:2023-02-10 17:14

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有沒有一種牙髓神經纖維的顯示方法?
關于牙齒中神經纖維的分布情況至今觀點尚不一致,有所爭議。為了解決這一難題,需要有能研究這一課題的染色技術,通過標本切片染色進行摸索試驗,根據鍍銀法的原理,對方法進行改良,使牙髓神經纖維能夠顯示從而為研究這一課題提供了技術支持,此法特別對纖細的神經纖維亦能清楚地觀察到,從而即達到了解神經纖維在牙齒中的分布與含量多少的目的。
1.組織處理:
將牙齒磨成0.1~0.2cm厚的薄片,經8%硝酸脫鈣,切片厚度5μm,常規脫蠟至水洗,再蒸餾水洗2次。
2.試劑制備:
(1)氨銀液:取20%硝酸銀30ml,無水乙醇20ml,混合,滴氨水,剛好溶解后,再加0.5ml氨水。

(2)淡綠液:用淡綠0.5g溶于50ml 0.5%醋酸液內。

3.染色方法:

(1)切片置37℃:20%硝酸銀,液內1小時,然后室溫中過夜 (切片呈微灰黃色)。

(2) 蒸餾水洗。

(3)入10%中性甲醛液2次,每次10~15秒。

(4)不經水洗,直接滴加氨銀液1分鐘。

(5)入10%中性甲醛液內1分鐘 (切片上下活動幾次使其還原均勻)。

(6) 蒸餾水洗。

(7)入0.2%氯化金調色 (鏡下控制)。

(8)蒸餾水洗后入5%硫代硫酸鈉液內2分鐘。

(9) 充分水洗。

(10) 淡綠液內2~4分鐘。

(11)脫水、透明和封固。

4.結果判定:

神經纖維呈黑色,背景呈綠色。

5.注意事項:

(1)牙齒脫鈣比一般骨組織脫鈣時間要長,最好在30~50℃的溫度下脫鈣可縮短時間,約3~5天即可,中間更換1次脫鈣液并振蕩幾次。

(2)一般組織切片在20%硝酸銀液內37℃,需30分鐘,牙齒則需1小時,尚需在室溫過夜。

(3)為增強對比度,突出神經纖維顯示,可作對比染色,使色調協調,對制作幻燈片和彩色照片尤為理想。在復染過程中不宜過深,要掌握適中,以免影響染色效果。

(4)氨銀液最好臨用時配制,時間長了因易出現銀顆粒沉淀,一定要過濾。

(5)從近牙髓質直到牙尖部的牙本質小管內均有神經纖維的分布,牙頸部和根部的內層及中層神經纖維最多,外層較少且細。

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