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【1001問】問題248:六胺銀替代氨銀液的新神經纖維染色法如何操作？

發表時間：2023-02-09 17:11

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六胺銀替代氨銀液的新神經纖維染色法如何操作？
神經系統的染色方法較多，除了普通染色之外，常常需要做多種特殊染色，神經纖維的染色出現了很多優秀的方法，其中多數方法需要高度熟練的技術，不易掌握，各有其優缺點，為改進神經纖維的染色方法，使其能揚長避短，有學者探索了利用六胺銀染神經纖維的新方法，以六胺銀代替歷來使用的氨銀液，其染色效果良好。
1.組織處理：

組織塊用200ml/L甲醛溶液充分固定2～3周，常規石蠟包埋及切片，切片厚度為5μm。

2.試劑制備：

（1）六胺銀液：在30g/L六次甲基四胺水溶液100ml中緩慢加入50g/L硝酸銀水溶液5ml，立即產生白色沉淀，邊加邊搖動，最終沉淀消失，變成透明的液體，在冰箱內保存。以此液為原液，臨用前取原液50ml加50g/L硼砂水溶液6ml。
（2）前處理液：蒸餾水100ml內加硼酸5g，加熱溶解，再將5g硝酸銀和10ml吡啶依次加入。
3.染色方法：
（1）切片常規脫蠟至水，再用蒸餾水洗。
（2）前處理液內處理12小時。
（3）蒸餾水洗三次。
（4）200ml/L中性甲醛溶液10分鐘。
（5）切片入六胺銀液，在60℃1～1.5小時。
（6）水洗后再用蒸餾水洗。
（7）10g/L氯化金水溶液中調色3小時。
（8） 水洗5分鐘。
（9）20g/L草酸水溶液中10分鐘。
（10） 水洗5分鐘。
（11）F-5酸性堅膜定影液2分鐘 （臨用前稀釋20倍使用）。
（12） 水洗5分鐘。
（13）常規脫水，透明，封固。
4.結果判定：

神經纖維呈深藍色或黑色。

5.本法特點：

（1）六胺銀對神經纖維也有選擇性的染色作用，六胺銀染色法具有銀的親和力強，對比度高，銀溶液較穩定的優點，即使在3～5μm的薄切片中，纖細的神經纖維和小腦的浦肯野細胞等也染色鮮艷，層次分明，對比度高，背景清晰，且方法較簡單，易掌握。

（2）在本方法中使用了前處理液，此液具有增強染色性的作用。切片在該液中的時間以4小時以上為宜，時間過短染色性減弱，在此液中處理12小時的切片，其染色能力增強。

6.注意事項：
（1）本方法是一種以六胺銀替代氨銀液的進行性染色，切片在此液中的時間應掌握好，肉眼觀察時以皮質呈銅色，髓質呈深黑色為宜，一般為1～5小時。
（2）銀染色用的各種器皿應十分清潔，以防切片污染，可用2g/L明膠水溶液處理載玻片和染色缸，其方法是把載玻片和染色缸浸泡在2g/L明膠水溶液中片刻，取出后在60℃溫箱中干燥，在800ml/L乙醇中浸泡3小時，再用蒸餾水洗后使用，經明膠處理的切片不被污染，背景清晰。

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