【細胞蠟塊】不同細胞量蠟塊的樣本制備方法

·應用·

可以藉由細針抽吸方式吸取樣本置于載玻片上以獲得細胞蠟塊。此方式易使樣品干燥/凝結; 將材料從載玻片上刮下并用拭鏡紙包裹，置于包埋盒中，加入中性緩沖福爾馬林后于病理學實驗室進行組織處理。

使用細針抽取1 ml BBC細胞蠟塊固定液沖洗非涂層試管樣品，將試管倒置在適當的濾紙上，待流體排出后，將紙張刮掉一個小區域。然后于組織病理學實驗室中進行常規樣本處理。

這是最常用的細胞蠟塊制作方法。通過添加離心細胞懸浮沉淀物制備細胞蠟塊。將細胞物質浸入血漿和凝血酶凝塊中（圖1）。將20ml樣品加入到falcon管中，并以1650rpm離心10分鐘。離心后，去除上清液。沉淀物中加入0.5ml血漿和兩滴3％曙紅水溶液并振蕩混合。接下來，添加0.25-0.5ml重新組成的凝血酶，并快速攪拌溶液，凝塊將在30-60秒內形成。將凝塊置于含有福爾馬林的包埋盒中。然后在組織病理學實驗室中進行常規處理樣本。

圖1. 血漿凝血酶細胞塊制備

該方法將適當細胞液在火棉膠袋中進行更充分的細胞蠟塊制備（圖2和3）。

火棉膠袋管的制備：將適量火膠棉試劑倒入15毫升玻璃管，讓火棉膠在管中放置10-15分鐘，將火棉膠倒回試劑瓶中，傾倒時振蕩管子，將試管倒置在試管架中，使其保持約30分鐘直至干燥。干燥后，用蒸餾水填充管子。如果袋子不夠干燥，管子看起來不透明，袋子即不能使用，應該丟棄，在使用前去除蒸餾水?；鹈弈z袋可存放長達一周。

火棉膠袋中細胞蠟塊的制備：使用分注器將樣本移到火棉布袋中。將火棉膠袋試管2500rpm離心10分鐘。小心吸去上清液。使用鑷子，將膠棉袋的邊緣裝配在管子的唇緣。使用鑷子將袋子從管子中取出，然后在顆粒上方系上棉線，用剪刀剪掉多余的膠棉袋和繩子，將剩余的袋子放入組織包埋盒中，并將包埋盒子放入裝有10％中性緩沖福爾馬林的樣品杯中，進行組織病理實驗室常規處理樣本。

圖2. 火棉膠袋細胞蠟塊制作

圖3. 火棉膠袋細胞蠟塊制作

該技術是藉由手動制備細胞蠟塊產品，使用帶有包埋盒和試劑的試劑盒，將包埋盒置于中性緩沖福爾馬林中進行組織病理實驗室常規樣本處理，通過細胞離心機濃縮細胞而制成。

該技術取代了耗時且昂貴的瓊脂和凝血酶技術，并且需要無磷固定劑，例如Zinc Formal-Fixx，Formal-Fixx或Glyo-Fixx（福爾馬林替代品），或省略馬林固定步驟在處理機上處理的樣本。也可以在快速活檢程序上操作。

該技術優先用于單獨散布的細胞學樣本，該方案包括濃縮細胞步驟且輕易切取細胞蠟塊表面。該技術可常用于宮頸ThinPreps細胞蠟塊制備，且易取得分散的異常個體細胞。

將樣品以3000rpm離心5分鐘，倒出上清液，沉淀物留在管中，HistoGel（HG）通過在微波以中等功率熔化5至15秒而液化，足夠的HG來覆蓋沉積物（約0.5ml）并與沉淀物混合使HG固化（室溫下2到3分鐘或使用冷卻塊時更快），由管壁加入10％中性福爾馬林劑將固化的HG沉淀物從管底部移出，并置于包埋盒的濾紙中進行組織病理學實驗室常規處理樣本，切取石蠟塊時應小心，因組織碎片可能正好在蠟塊表面。

該方法在細針抽吸針尖端的內腔形成凝塊。然后將凝塊直接轉移到福爾馬林中進行固定，這樣可防止診斷樣本丟失。使用組織凝塊法制備細胞蠟塊，利用21號/ 22號抽血空針，抽取樣本，而不是使用注射器將材料排到鹽水中制備蠟塊。

當樣本離開針尖時，將其收集到預切片的濾紙上，針尖以圓周運動方式引導形成錐形組織和血液混合物凝結。將凝塊在濾紙上稍微風干，確保凝固物是固體且細胞元素不會分散在液體介質。

將樣品包裹在薄紙中并放入包埋盒子和福爾馬林容器中，然后在組織病理實驗室中進行常規樣本處理。

使用福爾馬林或酒精煙霧固定樣本。該方法不需要額外的設備和試劑，材料是從細針抽吸中排出，在通用樣本容器內部形成小凝塊，翻轉蓋子，將一張薄紙球推入容器底部，將約2ml福爾馬林加入容器中并浸入薄紙中。如果使用酒精，則將兩個異丙醇拭子放置容器的底部。

將容器置于室溫并倒置至少6小時，這時樣品已經被福爾馬林或酒精蒸氣固定并變成固體，加入福爾馬林將其蓋子取下以打破樣本和蓋子之間的吸力。樣本放入包埋盒中，一旦從蓋子上取下，就需加入福爾馬林，然后在組織病理實驗室中進行常規樣本處理。

（使用百分比95酒精）。這種常用的方法使用酒精離心樣品，該樣本已預先固定于酒精溶液中。

將50 mL的患者樣品倒入標記的試管中，存放等分（如有必要）進行輔助測試，用固定劑（95％酒精）或溶解劑（例如CytoLyt）樣本持續離心10分鐘（2500轉/分鐘）。倒出上清液徹底震蕩渦旋樣本（確定是否需要）。

第二次離心以溶解血液量多或硬化/致密細胞顆粒樣本。添加等分試樣95％酒精與樣本，調勻再次離心。完全倒出酒精。此時，根據細胞顆粒的大小，擇最合適的方法。如果是細胞蠟塊顆粒非常小和/或沉積物很少或不能很好地包埋，則使用替代技術，如HistoGel或瓊脂。使用刮刀從錐形管中取出細胞沉淀，寬度須適當，放入組織包埋盒中，于組織包埋盒底部放入海綿，固化良好的細胞顆粒物沒有必要使用太大的海綿。

將適當大小的拭鏡紙放在藍色的海綿上，將細胞蠟塊置于拭鏡紙上，以包埋盒為中心，取第二張拭鏡紙以45度角放置在細胞蠟塊的頂部，再于第二張拭鏡紙頂部放置第二塊海綿，中間有一個孔，牢固地將包埋盒卡入到位，并將包埋盒放入福爾馬林中，然后在組織病理實驗室中進行常規樣本處理。

圖5. 用于細胞顆?；蚪M織碎片的細胞塊技術 - 方法1