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【1001問】問題245:有沒有一種快速的神經纖維染色方法？

發表時間：2023-02-06 10:30

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有沒有一種快速的神經纖維染色方法？？
目前用鍍銀法顯示神經纖維的方法已超過9種以上，各方法的基本點都是把固定后的標本或切片浸泡于硝酸銀溶液中，再用還原劑處理，使銀顆粒沉著于軸索的軸漿中呈黑色或深棕色。這些方法多數步驟繁瑣，費時費力，多需貴重金屬金的調色，有時染色并不理想。目前人們還用免疫組織化學方法以S-100蛋白顯示神經纖維，免疫組織化學方法所需時間較長，且試劑較貴，結果并不具優越性。此處要介紹的這種方法是目前來講最快速省時，最經濟實惠的染色法，此法是在改良Warthin-Starry染色法顯示口腔軟組織內螺旋體時發現的，Warthin-Starry螺旋體染色法可同時清晰地顯示黏膜組織內的神經纖維及其髓鞘。
一、組織處理
新鮮組織，OCT或纖維素包埋、液氮冷凍，-30℃低溫恒冷切片，切片厚5～10μm均可，丙酮固定15分鐘左右 （切片可置-80℃低溫冰箱長期保存）。
二、試劑配制
1.酸化水：每100ml蒸餾水加1%水性枸櫞酸4～8ml，pH 3.3～4.4。
2.1%硝酸銀液：1g硝酸銀加酸化水100ml避光保存。
3.2%硝酸銀液：2g硝酸銀加酸化水100ml避光保存。
4.0.12%對苯二酚液：0.12g對苯二酚加酸化水100ml。
5.5%明膠液：5g明膠加酸化水100ml。
6.顯影液：
①2%硝酸銀1.5ml
②5%明膠3.75ml
③0.12%對苯二酚2ml
將上三液放入54～56℃水浴中，臨用前依次混勻，立即使用。
三、染色方法
1.切片浸入80%乙醇5～10分鐘后至水洗。
2.浸入1%硝酸銀液中，43℃，30分鐘。
3.在切片上滴顯影液約5分鐘，使呈棕黃色。
4.用56℃水快速沖洗。5.蒸餾水沖洗。
6.脫水、透明、封固。
四、結果判定
神經纖維染成黑色、髓鞘染成棕褐色，背景為淺黃色。
五、方法特點
1.步驟簡單。
2.不需金調色。
3.省時省力，只需2小時左右即可完成，是目前染色速度最快的。
4.效果相當穩定，神經纖維及髓鞘易于識別。
5.只要有條件制作冰凍切片，及具備一個普通孵育箱即可工作。


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